ABSTRACT
Thirty-two clinical isolates of Enterococcus faecalis were screened for virulence factors. Twenty-four (75 percent) isolates produced hemolysin on Mueller-Hinton blood agar plates with sheep erythrocytes. However, the cell free heat-stable hemolysin was detected in all isolates (100 percent) of E. faecalis when grown in BHI-GA (BHI medium supplemented with 1 percent glucose and 0.03 percent L-arginine), but not in BHI broth alone. Twenty-four isolates (75 percent) produced caseinase and 23 (71.9 percent) lipase, but none of the isolates produced gelatinase. Fifteen (46.9 percent) culture filtrates caused rounding and membrane alterations with blebbing formation followed by death in HeLa and HEp-2 cells, but not in Vero cells. Thirteen isolates (40.6 percent) agglutinated rabbit erythrocytes, but did not produce hemagglutination in other bloods, containing or not 1 percent D-manose. Sixteen (50 percent) E. faecalis isolates adhered to HeLa cells and thirteen (40.6 percent) to HEp-2 cells, but all isolates adhered to polypropylene microtiter plates, indicating that clinical E. faecalis possess the ability to form biofilm in vitro. All the isolates were resistant to the bactericidal action of normal serum and did not produce aerobactin. These findings suggest that adherence and consequently biofilm formation on ephitelial host cells are the first steps in the E. faecalis virulence and that hemolysin, lipase, caseinase and other virulence factors act as causative of human epithelial cell damages.
Foram estudados os fatores de virulência de trinta e duas amostras de Enterococcus faecalis, isolados de casos clínicos. Vinte e quatro amostras (75 por cento) produziram hemolisina em ágar sangue preparado com hemácias de carneiro. No sobrenadante da cultura em BHI nenhuma amostra produziu hemolisina, no entanto quando cultivadas em meio BHI suplementado com 1 por cento de glucose e 0,03 por cento de L-arginina (BHI-GA), 100 por cento das amostras lisaram hemácias de carneiro. Vinte e quatro (75 por cento) amostras produziram caseinase e 23 (71,9 por cento) lipase, mas nenhuma amostra produziu gelatinase. Dezesseis (46,9 por cento) causaram arredondamento e alteração na membrana das células, com formação de vesículas e, em seguida, a morte das células HeLa e HEp-2. Treze amostras (40,6) aglutinaram eritrócitos de coelhos, mas não aglutinaram outros eritrócitos na presença ou na ausência de 1 por cento de D-manose. Dezesseis (50 por cento) aderiram em células HeLa e 13 (40,6 por cento) em células HEp-2, mas todas as amostras de E. faecalis aderiram na microplaca de polipropileno, indicando que E. faecalis isolados de casos clínicos possuem capacidade de formar biofilme "in vitro". Todos os isolados mostraram-se resistentes à ação bactericida do soro normal e não produziram aerobactina. Esses resultados sugerem que, inicialmente, a colonização ou infecção por E. faecalis ocorre pela aderência e formação de biofilme nas células epiteliais e a produção de hemolisina, lípase e caseinase pode atuar como fatores de virulência na infecção por E. faecalis.